Porvair P3使用SPE和蛋白質(zhì)沉淀技術(shù)在96孔板中制備生物樣品

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問(wèn)題

以幾種方式解決了從離體樣品（例如血液，精液，血清，尿液和脊髓液）中去除不需要的大生物分子，以便對(duì)這些樣品中的小分子進(jìn)行定量分析的問(wèn)題。需要去除的主要干擾成分是蛋白質(zhì)。這些大分子變得非常粘，并可能損壞分析儀器，尤其是色譜儀。較大的蛋白質(zhì)堵塞色譜柱中的小孔。

色譜是生命科學(xué)研究中要求定量分析的標(biāo)準(zhǔn)分離方法。可以使用氣相色譜儀或液相色譜儀進(jìn)行。兩者都容易受到蛋白質(zhì)分子的破壞。血清中還存在其他天然存在的物質(zhì)，這些物質(zhì)也可能導(dǎo)致分析柱堵塞。這一組稱為磷脂（PL），這是脂肪酸的衍生物，可以預(yù)期，它們也是相對(duì)“粘稠”的。

Porvair科學(xué)解決方案

Porvair目前提供2種類型的96孔過(guò)濾板，用于從最大2 ml的血清樣品中去除蛋白質(zhì)。最-簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的方法是P3（蛋白質(zhì)沉淀板），而C18 SPE板則更為復(fù)雜。平板和方法的選擇取決于所用樣品，所需的分析物和所需的靈敏度。

通常，在P3板上處理的樣品適合在HPLC系統(tǒng)的大口徑色譜柱上進(jìn)行分析，而在C18 SPE板上制備的樣品則適合于使用毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行GC分析。當(dāng)將這兩個(gè)系統(tǒng)連接到質(zhì)譜儀時(shí)會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。

LC-MS現(xiàn)在是一種非常普遍的技術(shù)，高分辨率的GC-MS現(xiàn)在可以用于檢測(cè)血清或血液樣品中的低水平代謝物和類藥物化合物。但是，在這些水平上，磷脂成為一個(gè)更大的問(wèn)題，一類稱為溶血磷脂（LPL）的PL（未被C18二氧化硅去除），這會(huì)導(dǎo)致所記錄的GC-MS信號(hào)出現(xiàn)異常效應(yīng)。

LPL引起一種稱為離子抑制的現(xiàn)象，其中LPL引起的高背景信號(hào)掩蓋了分析物產(chǎn)生的真實(shí)信號(hào)。它既可以升高也可以降低觀察到的分析物信號(hào)，因此很難進(jìn)行校正。

P3板中使用的Protein Crash技術(shù)不能去除PL或LPL，但在去除蛋白方面非常有效。它通過(guò)使用甲醇或乙腈使蛋白質(zhì)變性來(lái)起作用。蛋白質(zhì)從溶液中“崩裂”并形成大的粘性小球。它們被捕獲在一個(gè)開(kāi)孔結(jié)構(gòu)的過(guò)濾器中，在其下方是一個(gè)較小的超疏水過(guò)濾器，該過(guò)濾器將所有液體保留在其上方，直到施加真空以迫使包含目標(biāo)分析物的液體通過(guò)該過(guò)濾器并進(jìn)入下面的收集板。

傳統(tǒng)的固相萃取（SPE）方法使用非常精細(xì)的二氧化硅“三明治”，在兩個(gè)支撐玻璃料之間用長(zhǎng)鏈碳?xì)浠衔铮?8個(gè)碳原子）進(jìn)行功能化。長(zhǎng)碳鏈具有親油性，可阻止脂肪酸和球狀蛋白的通過(guò)。但是，由于電離的磷酸基團(tuán)而具有高極性的較小的LPL直接通過(guò)。除了P3中使用的加載步驟外，SPE板還需要額外的調(diào)理和清洗步驟。因此，這更加耗時(shí)并且難以自動(dòng)化。

在PTL開(kāi)發(fā)的實(shí)驗(yàn)板中，將額外的化合物碳酸鑭與c18二氧化硅混合。鑭系元素與磷酸鹽基團(tuán)牢固結(jié)合，因此建議LPL與鑭系元素結(jié)合。但是，如果無(wú)法使用靈敏的GC-MS設(shè)備，則不可能量化鑭系元素/磷酸鹽去除系統(tǒng)的功效。其他鑭系元素化合物也可能以更好的效果使用。